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Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像

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我要标记更多的染料,我要看的再深一点,我要看到体内变化的每个细节……

Olympus最新推出的FVMPE-RS通过提供毫秒级的高速成像以捕捉快速活体响应,即使在标本深处也可以用高能量进行理想的点激发.最好地满足活体或在体同步多波长深层成像观察的需要.另外还可以使用可见光激光或多光子激光刺激,与膜片钳等电生理数据保持同步性。
集高速成像、深层观察、多色成像、光刺激完美结合于一体的FVMPE-RS,将为广大生命科学工作者提供最佳的活体荧光成像平台.
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
扫描单元整合了新研制的高速共振扫描振镜和传统的扫描振镜,同一个系统既可以进行高速成像,也可以提供高清晰度的图像。
(一)高速扫描捕捉活体信号
512*512全视野扫描(视场数18)下的高速成像速度可达30fps,而局部扫描优化了回归时间,在512*32像素情况下速度可达438fps,使得FVMPE-RS系统可以捕捉到快速的钙离子通道反应和膜电位敏感染料的变化。
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
图像数据是在438fps的情况下采集到的。捕捉到没有变
形的快速运动的斑马鱼血管中荧光标记的细胞。
(二) 制冷的高灵敏度的GaAsP检测器获得高信噪比的图像
通过在光电倍增管(PMT)中使用磷砷化镓(GaAsP),即使荧光很弱也可以采集到高信噪比的图像,GaAsP PMT比多碱性PMT具有更高的量子效率并可进行半导体制冷,进一步提高了图像的信噪比。
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
          多碱性检测器采集的图像                              GaAsP检测器采集的图像
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
Arc-dVenus转基因老鼠(8周大),冠状脑组织块,海马齿状回成像
深度300-400μm(5μm步进)
(三) 采集活体更深层的图像
新研发的深层成像模式可以根据标本中散射情况相应地调节激光光束的直径。对于激光散射严重的活体标本来说,深层成像模式可以使更多的光子到达标本深处,得到更明亮的高分辨率的图像
激光光束直径(大)                激光光束直径(大)            激光光束直径(小)
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
轻微散射的标本                    严重散射的标本                    严重散射的标本
23层图像的最大强度投影,
深层成像模式可以提供更明亮的图像
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     正常图像                                                           深层成像模式
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
(四)检测光路更有效地捕捉弱荧光信号
检测光路的位置距离标本更近。收集信号的透镜扩大,增加了散射荧光的检测效率。
最大成像深度8mm的双光子专用物镜深层观察活体标本和固定透明的标本
XLPLN25XWMP2水浸物镜,工作距离2mm,在对活标本深层观察时提供高分辨率和大视野图像。同一系列的另外两颗物镜工作距离分别为4mm和8mm,对固定透明处理的标本进行精确地深层成像方面表现卓越。这些物镜都有校正环,可以调节浸入介质和标本之间由于折射率的不同而引起的球差,即使在标本深处成像时,也可以形成最佳的光聚焦点而没有能量强度损耗。而且每颗物镜都设计的视野很大,可以最有效地收集散射的荧光光子,成像更亮。
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
•大视野
尽管激发充分,但是在标本的深处,荧光会发生散射。这些大视野物镜可以收集散射的荧光光子以生成更明亮的图像。
(五)灵活的双波长采集模式
高度精确控制波长长达1300nm的激光光束,灵活进行双谱线多光子成像。
多波长激发和多光子成像
双谱线IR脉冲激光或者两个独立的IR脉冲激光可以完成多通道、多光子激发成像,并可用不同波长进行荧光发色基团的刺激。灵活而精确引入的IR使两条谱线精确重合。同步激发使不同的荧光发色基团的图像完美而平衡。针对每种荧光发色基团的最佳激发波长也可以通过避免使用800nm左右激发光而减少自发荧光。
InSight DeepSee支持双谱线激光同步激发,以及扩展的NIR多光子成像
InSight DeepSee红外脉冲激光系统完美地支持了680-1300nm激发的多光子成像。InSight DeepSee双谱线的版本提供两根激光输出:主输出可在680-1300nm范围内调节,另一个输出波长为1040nm。超过1000nm的高强度激光输出满足了很多新的多光子成像要求,覆盖了许多染料和荧光蛋白以及三次谐波成像而避免了UV
损伤。
Olympus全新多光子显微镜:颠覆你的多光子成像
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                                    用单一波长的IR脉冲激光同                      双谱线IR脉冲激光分别激发
                                    步激发GFP和DS-RED,图                       成像,GFP和DS-RED两个
                                              像串色现象严重。                              荧光蛋白可以清楚地分开。
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(六)全自动4轴校准模式


多色多光子激光采集图像提供了不同荧光基团最佳的激发光,减少了由于选择不理想的中间波长进行激发而出现的通道串色和光漂白。为了保证荧光信号共定位,4轴向自动调节可在2个水平和2个角度对每个激光谱线进行自动调节,只要单击补偿也可以对激光光束的位置以及激光入射的角度(造成像素位移的普遍原因)进行调整。这种自动调节机制可在多色激发过程中根据激光波长调节光轴,既节省时间又节省经历。也可提供基于软件的精细调节。
激光束1         激光束2
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      像素位移                        像素位移的校正