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做定量PCR 阴性对照一直都存在

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来源:转载网络 作者: zhangxf2014

刚开始做定量PCR,用的SYBR染料法,阴性对照(只加水)总是有扩增,Ct值都在35以下。之后换实验室、换水、换枪,引物重新合成,试剂也是新开的,但是还是存在阴性扩增,电泳检测,NTC条带和目的基因的一致。现在用UDG试剂做的,问题仍然无法解决,实在想不通是什么原因?实验室有个老师半个月就把定量做完了,我这都做了2个月了。求大神赐教啊!!!

想什么有什么 加油
 
先不做定量,不加引物试试
 

就是普通的PCR,做实验组,不加模板,不加模板和引物,

我曾经也受pcr污染的苦恼,后来p该基因的时候只能去另外一个实验室做,之前尝试过各种办法,包括移液器拆卸高压等均无果

请问你之后解决没有?
 
就是普通的PCR,做实验组,不加模板,不加模板和引物,
不加模板和引物是什么意思呀?我们只做过不加模板的。不加引物应该没有东西吧
 
不试试怎么知道
 
还有就是只加模板不加引物。找问题嘛,谁知道是什么原因。
好的,之后上图
 

请问你之后解决没有?

该基因在我博士期间一直困扰,因为我之前做了这个基因的表达还有报告载体,污染很难消除
...
好吧,且行且珍惜
 
换场所试试
 
楼主,你这应该是环境污染了!阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上,如果你的阴性对照35,目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风,或实验室消毒,或换个环境做。
 
换场所试试
换过几个不同的实验室,都没有用

楼主,你这应该是环境污染了!阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上,如果你的阴性对照35,目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风,或实验室消毒,或换个环境做。
换过不同的实验室了,结果还是一样。做的目的基因Ct和NTC都差不多
 
不爱做实验


1、引物换个位置重新设计
2、可以考虑用灭菌水,换个机器来取水
3、最好换到很少有人做实验的房间

1.引物有重新设计,但是效果不理想。
2.我们用的三蒸水都是灭菌之后才用,应该不会污染吧,也用过其他实验室的无菌水做过。
3.我们换过,还是不行。实在想不出是哪里出问题?